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                了解尺寸排阻色譜柱的特點及類別

                更新時間:2018-12-26瀏覽:2689次

                  尺寸排阻色譜柱的尺寸排阻色譜法(sizeexclusionchromatography,SEC),是按分子大小順序進行分離的一種色譜方法。
                被廣泛應用于大分子分級,即用來分析大分子物質相對分子質量的分布。
                分子篩效應:其固定相為化學惰性多孔物質——凝膠,凝膠具有一定大小的孔穴,體積大的分子不能滲透到孔穴中去而被排阻,較早的淋洗出來;中等體積的分子部分滲透;小分子可*滲透入內,后洗出色譜柱。這樣,樣品分子基本按其分子大小先后排阻,從柱中流出。
                尺寸排阻色譜柱特點:
                1.保留時間是分子尺寸的函數,有可能提供分子結構的某些信息。2.保留時間短,譜峰窄,易檢測,可采用靈敏度較低的檢測器。
                3.固定相與分子間作用力極弱,趨于零。由于,柱子不能很強保留分子因此柱壽命長。
                4.不能分辨分子大小相近的化合物,相對分子質量差別必須大于10%能得以分離。
                5.大分子的流程短,移動速度快,先流出色譜柱;小分子的流程長,移動速度慢,后流出色柱;而中等分子居兩者之間。
                6.生物相容性好,有很高的活性回收率。
                尺寸排阻色譜柱類型:
                凝膠過濾色譜:用于分析多肽、蛋白質、核酸、多糖等。凝膠的代表是葡萄糖系列;流動相是水
                凝膠滲透色譜法:用于分析高聚物的摩爾質量,如:聚乙烯、聚氯乙烯等。
                常用的凝膠為交聯聚苯乙烯凝膠;流動相是有機溶劑凝膠
                定義:指含有大量液體(一般是水)的柔軟而富于彈性的物質,它是一種經過交聯而具有立體網狀結構的多聚體。
                分子排阻色潽法對所用的凝膠的基本要求:
                a.化學性質惰性,不與溶質發生任何作用,可以反復使用而不改變其色譜性質。
                b.盡可能不帶電荷以防止發生離子交換作用。c.顆粒大小均勻,機械強度盡可能高。
                尺寸排阻色譜柱固定相分類:
                按機械強度可分為軟性、半剛性和剛性凝膠三類。
                軟性凝膠如葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠都具有較小的交聯結構,其微孔能吸入大量的溶劑,并能溶脹到它們干體的許多倍。它們適用以水溶性溶劑作流動相,一般用于小分子質量物質的分析,不適宜用在液相色譜中
                半剛性凝膠如高交聯度的聚苯乙烯(Styragel)比軟性凝膠稍耐壓,溶脹性不如軟性凝膠。常以有機溶劑作流動相。用于液相色譜時,流速不宜大。剛性凝膠如多孔硅膠、多孔玻璃等它們既可用水溶性溶劑又可用有機溶劑作流動相,可在較高壓強和較高流速下操作。一般控制壓強小于7MPa,流速<1cm3·s-1;否則將影響凝膠孔徑,造成不良分離。按化學性質分有機凝膠(均勻凝膠、半均勻凝膠、非均勻凝膠);無機凝膠(非均勻凝膠)。
                尺寸排阻色譜柱流動相的選擇:
                排阻色譜所選用的流動相必須能溶解樣品,并必須與凝膠本身非常相似,這樣才能潤濕凝膠。當采用軟性凝膠時,溶劑也必須能溶脹凝膠。
                溶劑的粘度要小,因為高粘度溶劑往往限制分子擴散作用而影響分離效果。

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